من اجل تثبيط التعبير الجيني لفيروس النزف عند الأرنب باستخدام خلايا مبيض الفأر الصيني

استعمال (RNAi) من اجل تثبيط التعبير الجيني لفيروس النزف عند الأرنب باستخدام خلايا مبيض الفأر الصيني ((CHO

RNAi Inhibition of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus (RHDV) Gene Expression in CHO Cell Line

يسبب فيروس النزف عند الأرنب (RHDV) خسارة فادحة في قطاع التربية وفي الحيوانات البرية أيضا. يمثل هذا العمل الخطوة الأولى باتجاه إنتاج أرانب مقاومة لهذا الفيروس باستخدام تقنية مبنية على ظاهرة تداخل الحمض النووي الريبوزي مزدوج السلسلة (RNAinterference) من خلال تثبيط التعبير الجيني لجزء من منظومة الفيروس الوراثية وبالتالي منع تكاثره. هذا الجزء متاح تحت الرقم EU003582.1 في الـ NCBI من النيوكليوتيدة 372 وحتى 392 (McIntosh et al., 2007). تم إدخال بلازميد في خلايا مبيض الفأرالصيني، يحتوي هذا البلازميد بداخل جين اللوسيفيريز على جزء من منظومة الفيروس الوراثية (بروتين التحامي)، وتم كذلك في نفس الخلايا إدخال بلازميد آخر يحتوي على DNA مصمم بهدف أن يشفر RNA الذي ينطوي على نفسه ليكوِّن سلسلة RNA مزدوج السلسلة بطول 21 زوجا من النيوكليوتيدات. هذه السلسلة مصممة لتعمل ك siRNA وتثبط بواسطة ظاهرة تداخل الـ RNAالتعبير للجزء المذكور أعلاه من منظومة الفيروس المتطابقة من حيث السلسلة النيوكليوتيدية ((RNAi. أظهرت النتائج تثبيطا للتعبير الجيني الفيروسي ممثلا بقراءات البروتين الإلتحامي (اللوسيفيريز) يتراوح ما بين 82 إلى 87% من التعبير للجين الالتحامي وبالتالي لذلك الجزء من منظومة الفيروس بداخله. هذه النتائج مشجعة إلا أنها تحتاج إلي مزيد من الأبحاث لإقرارها وللحصول على مزيد من التثبيط باستخدام خلايا ومن ثم باستخدام أرانب معدلة وراثياً.

Rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) causes great losses and is life threatening to both wild and domestic rabbits. This work represents the first step toward production of transgenic rabbits resistant to RHDV by RNAi through the inhibition of expression of a part of the RHDV genome and the consequent inhibition of its multiplication. This part of RHDV genome is available under the accession EU003582.1 in NCBI from the nucleotide 372 to 392 (McIntosh et al., 2007). Chinese Hamster Ovary (CHO) cell line was transfected with a plasmid harboring the RHDV target in the DNA segment coding for luciferase (fusion protein) and co-transfected with another plasmid harboring a DNA sequence designed to code for a homologous double stranded RNA sequence of 21 pb. This sequence acts as siRNA to inhibit the expression of the viral genomic part through RNAi. The series of co-transfection resulted in an inhibition level ranging from 82 to 87% of expression of the fusion protein and consequently of the RHDV target. These results are encouraging. However, further investigations are necessary to obtain more inhibition ex-vivo with validation in vivo using transgenic rabbits.

النص الكامل